دانلود تحقیق با موضوع پزشکی،
در قالب word و در 26 صفحه، قابل ویرایش.
بخشی از متن تحقیق:
ASO:
در نوعي از اين روش كه لكه گذاري نقطه اي ناميده مي شود، يك جفت اليگونوكلئوتيد آلل مخصوص كه با مواد راديواكتيو فلورسنت نشاندار شده اند (پروب)، طراحي مي شدند به صورتي كه هر يك از اين اليگونوكلئوتيدها به طور اختصاصي با آلل نرمال يا جهش يافته هيبريد مي شوند. DNA مورد نظر كه از لحاظ جهش بررسي مي شود نيز بايستي در قسمتي كه جهش مورد نظر ما را در بر مي گيرد توسط PCR تكثير شود و سپس اين DNA برروي غشاهاي نايلوني تثبيت شود. حال اين غشاها در معرض اليگونوكلئوتيدها قرار گرفته و هيبريداسيون درشرايط خاص انجام مي گيرد. با بررسي لكه هاي تيجاد شده در روي غشا مي توان ژنوتيپ فرد را مشخص نمود [].
در نوعي ديگر از ASO كه لكه گذاري نقطه اي معكوس ناميده مي شود، اليگونوكلئوتيدهاي نشاندار شده توسط دم پلي T و يا گروههاي آميني كه با انتهاي’5 اين اليگونوكلئوتديها واكنش نشان دهند، برروي غشا تثبيت مي شوند.
حال غشا در معرض DNA مورد نظر قرار گرفته و هيبريداسيون صورت مي گيرد. در مرحلة نهايي لكه هاي ايجاد شده روي غشا بررسي مي شوند.
يكي از مزيتهاي عمدة اين روش اين است كه مي توان همزمان آللهاي مختلف را در يكي نمونة تكثير شده DNA بررسي كرد.
از ديگر مزيتهاي آن ساده، ارزان، دقيق و غيرراديواكتيو بودن مي باشد [].
ARMS: اين روش يك روشي ساده براي تخمين جهش هايي است كه در اثر تغيير يك باز و يا حذف و ورود اعداد كم نوكلئوتيد حاصل مي شود. اساس اين روش اين است كه اليگونوكلئوتيدهايي كه مكمل با يك توالي DNA مشخص، به جز براي يك اشتباه جور در انتهاي ‘3 باشند. در شرايط مناسب به عنوان پرايمر PCR عمل نمي كنند.
به طور معمول دراين روش از دو واكنش مكمل استفاده مي شود. واكنش اول يك پرايمر است كه مخصوص توالي DNA نرمال است را در بر مي يگرد. به اين ترتيب اين پرايمر نمي تواند DNA جهش يافته در لوكوس مورد نظر را تكثير دهد. واكنش دوم يك پرايمر مخصوص جهش را دربر مي گيرد كه DNA نرمال را نمي تواند تكثير دهد. دو پرايمر نرمال و جهش در بازانتهاي ‘3 با يكديگر تفاوت دارند و در ساير قسمتها مشابه يكديگر مي باشند. جهت كنترل PCR نيز در هر واكنش يك پرايمر كنترل استفاده مي شود. به طوري كه در هر واكنش PCR مربوط به پرايمرهاي جهش و نرمال كه محصولي حاصل نشود، وجود محصول مربوط به پرايمر كنترل نشان مي دهد PCR مشكلي ندارد.
ژنوتيپ افراد با بررسي محصولات تكثير شده مشخص يم شوند. در فرد نرمال محصول PCR فقط در واكنش نرمال ايجاد مي شود و در فرد نفروزيگوت در هر واكنش تكثير انجام مي گيرد. در يك فرد هموزيگوت جهش يافته نيز تنها در واكنش جهش تكثير صورت مي گيرد
